异种抗体研发制造

单克隆抗体：通过该技术融合形成的杂交瘤（hybridoma），既具有骨髓瘤细胞大量扩增和永生的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。每个杂交瘤细胞由一个B细胞融合而成，而每个B细胞克隆只识别一种抗原表位，因此经筛选和克隆化的杂交瘤细胞只能合成和分泌识别单一抗原表位的特异性抗体，称为单克隆抗体。其优点是结构均一、纯度高、特异性强、效价高、血清交叉反应少、制备成本低；缺点是鼠源性mAb对人具有较强的免疫原性，反复免疫人体后可诱导产生人抗鼠抗体，从而削弱了其作用，甚至导致机体组织细胞的免疫病理损伤，因此需要进一步通过抗体工程技术制备人一鼠嵌合抗体、人源化抗体或人源抗体。单克隆抗体可以用于研究疾病的发病机制。异种抗体研发制造

抗体特性和功能：正常人血清lgD浓度很低，仪占血清Ig总量的0.2%。IgD可在个体发育的任何时间产生。5类lg中，IgD的铰链区很长，易被蛋白酶水解，故其半衰期很短（只3天）。lgD分为两型：血清型IgD的生物学功能尚不清楚；膜结合型IgD（mlgD）构成BCR，是B细胞分化发育成熟的标志，未成熟B细胞只表达mlgM，成熟B细胞可同时表达mlgM和mIgD，称为初始B细胞（naive B cell）。活化的B细胞或记忆性B细胞表面的mlgD会逐渐消失。IgE是正常人血清中含量很少的Ig，血清浓度极低，约为5×10-5mg/ml。IgE主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌。其重要特征为糖含量较高。IgE为亲细胞抗体，其CH2和CH3结构域可与肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的IgE高亲和力Fc受体结合，引起I型超敏反应。此外，IgE与机体的抗寄生虫免疫相关。南京自身抗体研发团队多克隆抗体可以用于检测未知的抗原，因为其能够识别多个不同的表位。

单克隆抗体技术在临床应用中为疾病的诊断、调理提供了新手段，作为调理用药物，单克隆抗体主要应用于tumour、自身免疫疾病、部位移植排斥及病毒传染等领域。单克隆抗体也可用于tumour的导向调理，将针对某一tumour抗原的单克隆抗体与化疗或放疗药物连接，利用单克隆抗体的专一性识别结合特点，将药物携带至靶细胞并直接将其杀伤。由于单克隆抗体具有特异性强、纯度高、均一性好等优点，极大促进了单克隆抗体检测试剂盒的发展，在病原微生物、免疫细胞及细胞因子的检测诊断中广泛应用。若将放射性标记物与单克隆抗体连接，注入患者体内后可进行放射免疫显像，协助tumour的诊断。在亲和色谱中单克隆抗体是重要的配体，若将单克隆抗体固定到一个惰性的固相基质上，则可用于特异性抗原分子的高度纯化。

1937年，Tiselius和Kabat用电泳方法将血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等组分，并发现抗体主要存在于γ区，因此抗体又被称为γ球蛋白。随后，经1968年和1972年的世界卫生组织和国际免疫学会联合会讨论决定，将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。Ig可分为分泌型Ig（secreted Ig，SIg）和膜型Ig（membrane Ig，mIg）。SIg主要存在于血液和组织液中，行使抗体的各种功能；mIg主要构成B细胞膜表面的抗原受体。单克隆抗体的生产过程需要大量的细胞培养和纯化步骤。

抗体结构域：轻链有VL和CL两个结构域；IgG、IgA和IgD的重链有VH、CH1、CH2和CH3四个结构域；IgM和IgE的重链有五个结构域，即多一个CH4结构域。每个结构域由约110个氨基酸组成，氨基酸序列具有相似性，其二级结构是由几条多肽链折叠形成的两个反向平行的β片层（anti-parallel β sheet）构成的，两个β片层中心的两个半胱氨酸残基由一个链内二硫键垂直连接，形成一个“β桶状（βbarrel）”或“β-三明治 （β sandwich）”结构，这种折式称为免疫球蛋白折叠（immunoglobulin folding）。许多膜型和分泌型的蛋白质分子也含有这类独特折叠的二级结构，因此，这类分子被统称为免疫球蛋白超家族（immunoglobulinsuperfamily，IgSF）。多克隆抗体的结合位点通常存在多种结合位点，可以有不同的结合特异性。南京自身抗体研发团队

多克隆抗体的制备过程相对复杂，需要较长时间和资源。异种抗体研发制造

免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫部位，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。细胞融合采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。异种抗体研发制造